通用和基础缓冲液中限制酶的相对活性
我们的限制酶配备了最佳的通用缓冲区(五种普遍缓冲区中的一个;在下表中以蓝色表示)。每个其他通用缓冲液中的相对活性被归一化为最佳缓冲液,其中最佳缓冲液中每种酶的活性表示为100%。()中的值表示可能受星活动影响的缓冲区。为了避免这些效果,建议使用在蓝色或粉红色中突出的缓冲器。
几种特定酶(ACCIII,BALI,BCNI,BGLI,BPU1102I,CFR10i,ECO52i,NRUI,PSHBI,SNABI,SSPI,TAQI和VPAK11BI)各自提供专门为特定酶的基础缓冲区。这些基础缓冲剂的组合物根据酶而变化。
有关双重消化的信息,请参阅具有限制酶的双重消化的通用缓冲剂页。
下表列表的表格普遍缓冲区中限制酶的相对活动和使用和缓冲区的使用说明。
限制酶 |
相对活动(%) |
L. |
M. |
H |
K. |
T + BSA. |
基础*** |
Aatii. |
<20 |
<20 |
<20 |
<20 |
100. |
120. |
ACCI. |
20. |
100. |
<20 |
(<20) |
160. |
80 |
Accii. |
(260) |
100. |
<20 |
20. |
200. |
160. |
ACCIII. |
(<20) |
(<20) |
20. |
(80) |
(<20) |
100. |
AFAI. |
60. |
60. |
40 |
60. |
100. |
100. |
aflii. |
20. |
80 * |
<20 |
<20 |
140. |
120. |
alui. |
100. |
100. |
<20 |
40 |
200. |
120. |
AOR13HI |
<20 |
20. |
<20 |
80* |
80 |
100. |
aor51hi. |
80 |
100. |
<20 |
20. |
120. |
120. |
apai. |
100. |
<20 |
<20 |
<20 |
<20 |
120. |
apali. |
100. |
20. |
<20 |
<20 |
120. |
120. |
Avai. |
(<20) |
100. |
20. |
40 |
100. |
120. |
Avaii. |
80 |
100. |
<20 |
20. |
100. |
100. |
巴厘岛 |
20. |
20. |
<20 |
<20 |
40 |
100. |
Bamhi. |
(<20) |
<20 |
40 |
100. |
(<20) |
80 |
BANII. |
(120) |
(120) |
100. |
80 |
(100) |
100. |
BCNI. |
<20 |
20. |
40 |
60. |
60. |
100. |
BGLI. |
<20 |
<20 |
20. |
40 |
<20 |
100. |
BGLII. |
<20 |
20. |
100. |
(100) |
(60) |
100. |
blni. |
<20 |
20. |
40 |
100. |
20. |
120. |
BMET110I. |
<20 |
<20 |
20. |
100. |
<20 |
140. |
bmgt120i. |
<20 |
<20 |
100. |
40 |
<20 |
240. |
bpu1102i. |
<20 |
<20 |
<20 |
40 |
60. |
100. |
bspt104i. |
100. |
60. |
<20 |
<20 |
100. |
120. |
bspt107i. |
<20 |
20. |
80 |
100. |
20. |
100. |
bsp1286i. |
100. |
20. |
<20 |
<20 |
60. |
100. |
bsp1407i. |
20. |
60. |
20. |
20. |
100. |
100. |
BSSHII. |
100. |
100. |
60. |
20. |
140. |
100. |
BSTPI. |
(<20) |
(60) |
100. |
(100) |
(100) |
100. |
BSTXI. |
<20 |
40 |
100. |
<20 |
<20 |
120. |
bst1107i. |
(<20) |
60. |
100. |
100. |
40 |
100. |
CFR10I. |
(<20) |
(<20) |
(<20) |
40 |
(20) |
100. |
搭配 |
40 |
100. |
120. |
100. |
60. |
100. |
cpoi. |
<20 |
<20 |
80 |
100. |
<20 |
100. |
德莱 |
100. |
100. |
60. |
100. |
80 |
80 |
EAEI. |
60. |
100. |
<20 |
<20 |
120. |
160. |
ECOO65I. |
(20) |
(60) |
60.* |
40 |
40 |
100. |
ECOO109I. |
100. |
60. |
<20 |
<20 |
100. |
160. |
ecoRi. |
(20) |
(100) |
100. |
(120) |
(80) |
120. |
EcoRv. |
(<20) |
(40) |
100. |
(120) |
(40) |
100. |
ecot14i |
(<20) |
(40) |
100. |
120. |
(60) |
100. |
ECOT22I. |
<20 |
20. |
100. |
(140) |
(20) |
120. |
Eco52i. |
<20 |
<20 |
<20 |
<20 |
<20 |
100. |
Eco81i. |
<20 |
100. |
<20 |
<20 |
100. |
160. |
FBAI. |
(<20) |
(<20) |
(80) |
100. |
(20) |
100. |
Foki. |
(20) |
(60) |
<20 |
<20 |
(200) |
100. |
Haeii. |
80 |
100. |
<20 |
80 |
140. |
100. |
Haeiii. |
60. |
100. |
100. |
60. |
100. |
100. |
HAPII. |
100. |
60. |
<20 |
<20 |
100. |
80 |
h |
80 |
100. |
100. |
120. |
120. |
100. |
Hincii. |
20. |
100. |
20. |
40 |
100. |
80 |
hindiii. |
(60) |
100. |
<20 |
200. |
(100) |
80 |
Hinfi. |
80 |
100. |
100. |
160. |
60. |
100. |
Hin1i. |
40 |
80 * |
<20 |
20. |
60. |
160. |
HPAI. |
<20 |
(40) |
20. |
100. |
(80) |
100. |
kpni. |
100. |
60. |
<20 |
<20 |
(100) |
80 |
MBOI. |
20. |
40 |
60. |
100. |
40 |
100. |
mboii. |
100. |
60. |
<20 |
<20 |
60. |
100. |
mfli. |
100. |
80 |
<20 |
<20 |
80 |
100. |
MLUI. |
60. |
60. |
100. |
(100) |
60. |
100. |
MSPI. |
80 |
80 |
<20 |
100. |
100. |
80 |
蒙尼 |
(200) |
100 * |
<20 |
<20 |
160. |
100. |
mvai. |
(<20) |
(40) |
80 |
100. |
(20) |
120. |
NAEI. |
100. |
<20 |
<20 |
<20 |
100. |
120. |
NCOI. |
(40) |
(60) |
20. |
60 * |
(60) |
160. |
ndei. |
<20 |
40 |
100. |
100. |
80 |
100. |
NHEI. |
(120) |
100. |
<20 |
<20 |
(160) |
100. |
诺迪 |
(<20) |
(<20) |
20 ** |
<20 |
(<20) |
100. |
nrui. |
0. |
<20 |
20. |
20. |
<20 |
100. |
nsbi. |
40 |
20. |
<20 |
60. |
100. |
100. |
PMACI. |
100. |
80 |
<20 |
<20 |
100. |
100. |
PSHAI. |
20. |
40 |
<20 |
100. |
60. |
160. |
PSHBI. |
(20) |
(40) |
20. |
40 |
40 |
100. |
psp1406i. |
20. |
60. |
<20 |
<20 |
100. |
100. |
PSTI. |
(<20) |
(60) |
100. |
80 |
(20) |
80 |
pvui. |
(<20) |
(20) |
(40) |
80 * |
(40) |
120. |
pvuii. |
(80) |
100. |
40 |
<20 |
(40) |
100. |
SACI. |
100. |
60. |
<20 |
<20 |
80 |
80 |
SACII. |
40 |
20. |
<20 |
<20 |
100. |
40 |
萨利 |
<20 |
<20 |
100. |
(20) |
<20 |
120. |
Sau3ai. |
(60) |
80 |
100. |
<20 |
(80) |
100. |
塞 |
(<20) |
(<20) |
100. |
(60) |
(<20) |
100. |
SFII. |
(40) |
100. |
<20 |
<20 |
100. |
100. |
Smai |
<20 |
<20 |
<20 |
<20 |
100. |
100. |
SMII. |
<10 |
<20 |
100. |
40 |
<10 |
100. |
Snabi. |
(20) |
(40) |
<20 |
<20 |
(40) |
100. |
spei. |
(80) |
100. |
80 |
100. |
(80) |
100. |
sphi. |
(20) |
(40) |
100. |
120. |
(20) |
100. |
SSE8387I. |
(120) |
60 * |
<20 |
<20 |
(60) |
100. |
SSPI. |
(<20) |
(60) |
40 |
(100) |
(80) |
100. |
斯利伊 |
60. |
100. |
60. |
80 |
140. |
100. |
Taqi. |
40 |
80 |
60. |
60. |
80 |
100. |
tth111i. |
(20) |
80 |
40 |
100. |
(80) |
120. |
van91i. |
<20 |
(20) |
60. |
100. |
(60) |
100. |
VPAK11BI. |
<20 |
<20 |
60. |
(40) |
<20 |
100. |
XBai. |
<20 |
80 * |
20. |
<20 |
120. |
120. |
XHOI. |
<20 |
60. |
100. |
160. |
60. |
100. |
XSPI. |
<20 |
60. |
<20 |
100. |
160. |
100. |
蓝色:缓冲酶提供限制酶
粉红色:建议使用的替代缓冲区
* + 0.01%BSA→100%AFLII,ECOO65i,Foki,Hin1i,Muni,Noi,Pvui,Spli,SSE8387i,Xbai
** + 0.01%BSA + 01%TRITON X-100→100%NOTI
***基础缓冲液的组合物是酶特异性的。
使用加载缓冲区的说明
将所有限制酶提供10×加载缓冲液(1mL),含有1%SDS,50%甘油和0.05%溴苯酚蓝色。添加> 1/10体积的10x加载缓冲液以停止消化反应,并在琼脂糖凝胶上运行。
笔记:SDS可在室温下储存期间沉淀。如果存在沉淀物,在使用前溶解在温水浴中。
使用通用缓冲区的说明
通用缓冲器以10x浓度提供。请加入1/10的反应混合物的体积。由于10x T4缓冲液不含BSA,请务必将BSA添加到最终浓度为0.01%。当BSA或TRITON X-100加入到反应体系中时,一些限制酶应该表现出100%的活性。由于BSA和TRITON X-100以10倍浓度(0.1%)供应酶,因此在开始反应之前,请务必将反应混合物的体积加入到缓冲液中。
提供的通用缓冲剂和其他试剂的组成
通用缓冲区 |
作品 |
10x L. |
100 mm tris-hcl(pH 7.5) |
100 mm mgcl.2 |
10 mm dithiothreitol. |
10x M. |
100 mm tris-hcl(pH 7.5) |
100 mm mgcl.2 |
10 mm dithiothreitol. |
500 mm NaCl. |
10x H. |
500 mm tris-HCl(pH7.5) |
100 mm mgcl.2 |
10 mm dithiothreitol. |
1,000毫米NaCl. |
10x K. |
200 mm Tris-HCl(pH 8.5) |
100 mm mgcl.2 |
10 mm dithiothreitol. |
1,000 mm kcl. |
10x T. (BSA) |
330毫米三乙酸盐(pH 7.9) |
100 mm mg-醋酸盐 |
5 mm dithiothreitol. |
660毫米k-醋酸酯 |
0.1%BSA溶解在无菌水中 |
0.1%Triton X-100 |