他标记的蛋白质 - 爪金属亲和树脂的批量或重力流动纯化
TALON his-tag纯化树脂可以让您在天然或变性条件下,从细菌、哺乳动物、酵母和杆状病毒感染的细胞中制备异常纯的his-tag蛋白。TALON是一种带钴的固定金属亲和层析(IMAC)树脂,与带镍的树脂相比,它与his标记的蛋白质结合的特异性更高。因此,TALON树脂提供了最高纯度的他标记的蛋白质。此外,每个钴离子在树脂上有四个位点结合,导致金属离子泄漏低。
TALON his-tag纯化树脂可以让您在天然或变性条件下,从细菌、哺乳动物、酵母和杆状病毒感染的细胞中制备异常纯的his-tag蛋白。TALON是一种带钴的固定金属亲和层析(IMAC)树脂,与带镍的树脂相比,它与his标记的蛋白质结合的特异性更高。因此,TALON树脂提供了最高纯度的他标记的蛋白质。此外,每个钴离子在树脂上有四个位点结合,导致金属离子泄漏低。
反应铁芯含有最高纯度的钴
TALON金属亲和树脂与钴离子络合,使其对his标记的蛋白质具有高度选择性。TALON的钴反应核心有严格的空间要求——只有含有相邻组氨酸或特殊位置的相邻组氨酸的蛋白质才能结合。镍基树脂(如Ni-NTA)的空间要求不那么严格,这些树脂对随机定位(如非his标记)组氨酸有更高的亲和力。结果,TALON树脂能更明确地与他标记的蛋白质结合。
均匀的矩阵保证较少的污染
钴基树脂比镍基树脂具有更均匀的结构。TALON树脂含有带负电荷的反应位点,形成三维口袋。每个口袋包含三个羧基和一个氮原子,它们共同结合一个带正电的钴离子——这种安排使钴离子结合到两个相邻的组氨酸残基上。在这种结构中,钴被紧紧地结合在一起,不会从树脂中滤出。镍基树脂在结构上不均匀,因为镍离子可以形成两种不同的配位络合物:一种形成三维口袋,类似于TALON配体,另一种形成平面结构。在这种扭曲的平面结构中,每个镍离子只与两个羧基和一个氮原子结合。因此,平面结构使镍离子结合不那么紧密,使它们能够从树脂中浸出。TALON金属亲和树脂,基质均匀,在多种纯化条件下提供高亲和结合,确保最佳的蛋白纯化。
选择原生或变性净化条件
Talon树脂在各种纯化条件下保留其蛋白质结合特异性和产率。它在变性和天然(非变性)条件下是稳定的。决定是否使用本地或变性纯化条件取决于蛋白质位置,溶解度,他标签,下游应用和生物活性的保存。
- 本地条件
在天然条件下纯化蛋白质是保持其生物活性的最有效方法,但要求蛋白质是可溶解的。优势包括:
- 消除纯化结束时的复归步骤,节省时间,并防止显着丧失活动
- 保留使酶亚基、辅助因子和相关蛋白copurify的能力
- 变性条件
因为在原核系统中过度表达的蛋白质有时会形成不可溶的聚集体,称为包涵体,你可能需要在变性条件下纯化蛋白质——使用强变性剂,如6m胍或8m尿素来增强蛋白质的溶解性。优势包括:
- 包涵体和his标记蛋白的完全溶解
- 改进了与基质的结合,减少了非特异性结合,因为his标记完全暴露
在变性条件下纯化的his标记蛋白可以直接用于后续应用,或者可能需要变性和重新折叠。蛋白复性和复性可以在从柱中洗脱之前进行。然而,重组蛋白的产量将低于自然条件下的产量,因为尿素和胍分子与组氨酸竞争与金属结合。
还原剂的使用
TALON树脂可以在β-巯基乙醇的存在下进行纯化,但不能在DTT或DTE的存在下进行,以保存对给定蛋白的生物活性和结构很重要的还原巯基(-SH)。在β-巯基乙醇存在下,TALON的产率高于Ni-NTA。
概述
- 对他标记的蛋白质表现出高亲和力
- 没有蛋白质的共用
- 抗金属泄漏
- 在广泛的净化条件下表现良好
更多的信息
应用程序
纯化的重组his标记蛋白可用于:
- 晶体学
- 功能分析
- 结构调查
- 其他应用程序
额外产品信息
有关存储条件、产品部件、技术规格等信息,请参见产品分析证书。请参阅套件组件清单确定套件组件。分析证书和套件组件清单位于“文档”页签下。
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