qRT-PCR逆转录病毒滴定法
retrox qRT-PCR滴定试剂盒提供了一种快速、简单的测定逆转录病毒滴度的方法。在使用qRT-PCR和TB Green技术量化逆转录病毒基因组拷贝数之前,这些试剂盒使用快速的RNA纯化步骤。
retrox qRT-PCR滴定试剂盒提供了一种快速、简单的测定逆转录病毒滴度的方法。在使用qRT-PCR和TB Green技术量化逆转录病毒基因组拷贝数之前,这些试剂盒使用快速的RNA纯化步骤。
逆转录病毒滴度的快速测定
传统的滴定方法需要10天才能完成,而这些滴定试剂盒只需要4小时,并且适用于所有基于mmlv的逆转录病毒载体(不是MSCV)。使用qRT-PCR大大缩短了病毒获取和靶细胞感染之间的时间间隔,允许您在同一天执行这两项操作。
实现一致的逆转录病毒转导
逆转录病毒基因传递系统的一个主要优点是能够通过调节感染的多样性(MOI)来控制进入目标细胞的病毒基因组的数量,从而控制基因表达水平。这些滴定试剂盒可以让你快速确定你细胞类型中的逆转录病毒拷贝数和逆转录病毒感染性之间的关系,并最终让你控制实验之间的表达水平。
它是如何工作的
qRT-PCR程序需要连续稀释你的样本和已知拷贝数的对照RNA(提供),一步qRT-PCR。你的样本中包含的逆转录病毒拷贝数可以通过比较Ct值和标准曲线来确定。
RNA纯化和DNase I处理步骤对该协议至关重要,因此即使使用瞬态转染包装的病毒,总是含有残留的质粒DNA,也可以使用该试剂盒准确定量。
概述
- 使用结核病绿色实时PCR测量逆转录病毒滴度
- 逆转录病毒拷贝数的确定是通过比较样本的Ct和由校准的控制模板得到的标准曲线
- 确认你的逆转录病毒包装反应的成功避免在你的实验上浪费时间
- 执行一致的实验,控制拷贝数,从而控制表达水平
- 确保足够的MOI,使100%的细胞被转导
- 包含200个qRT-PCR反应*,可纯化10种不同的病毒制剂
*本试剂盒所包含的引物旨在扩增MMLV基因组邻近包装信号的保守区域。这些引物与Takara Bio出售的所有MMLV载体兼容(例如,q级数和l级数的向量)和最常用的逆转录病毒载体。然而,携带明显改变包装信号的载体,如MSCV载体所携带的,将与试剂盒不兼容。如果您不确定该试剂盒是否与您的矢量兼容,请将您的矢量序列发送到Technical_Support@takarabio.com,我们的支持团队将很高兴确认引物兼容性。
更多的信息
有关存储条件、产品部件、技术规格等信息,请参见产品分析证书。请参阅套件组件清单确定套件组件。分析证书和套件组件清单位于“文档”页签下。
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