的DEF-CS系统是一个强大的培养系统,在无喂养和定义的环境中有效地扩展人类诱导多能干细胞(iPS)。该系统包括培养所需的所有组件(即培养基、添加剂和涂层化合物)。在这个系统中,诱导多能干细胞生长在未分化的、同质的单层细胞中,生长速度一致。
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使用DEF-CS系统培养人类iPS细胞
的DEF-CS系统是一个强大的培养系统,在无喂养和定义的环境中有效地扩展人类诱导多能干细胞(iPS)。该系统包括培养所需的所有组件(即培养基、添加剂和涂层化合物)。在这个系统中,诱导多能干细胞生长在未分化的、同质的单层细胞中,生长速度一致。
DEF-CS系统的一个优点是,它具有将人类iPS细胞培养为单一、同质单层未分化细胞的独特潜力。正因为如此,在DEF-CS中培养的人类iPS细胞将与传统聚集培养方法培养的细胞看起来非常不同。值得注意的是,细胞质与细胞核的比例会更大,而密度较低的细胞会表现出一种表明分化的形态。然而,尽管如此,在DEF-CS培养基中培养的人iPS细胞保留了其多能性且未分化.作为参考,下图描述了新传代的人类iPS细胞在DEF-CS系统、饲喂细胞、mtesr1培养基(STEMCELL Technologies)或Essential 8培养基(E8;生命技术)。
当最初将iPS细胞转移到该系统时,某些细胞特征可能与以前使用的培养系统不同。DEF-CS系统采用单细胞传代,因此在DEF-CS系统中培养的细胞的形态不同于在使用聚集传代方法的系统中培养的细胞。第二,newly传代的细胞倾向于扩散。然而,当细胞增殖时,细胞密度增加,出现典型的未分化干细胞形态(即高核质比、清晰的边界和突出的核仁)。下图显示了在DEF-CS系统中培养的人类iPS细胞系。细胞密度为5 x 104细胞/厘米2对应于新传代的细胞,而较高的细胞密度是在培养数天后。
在其他培养系统中保存的未分化人类iPS细胞可以很容易地转移到DEF-CS系统。细胞系需要2-5代才能适应DEF-CS系统。应遵循标准DEF-CS培养方案,尽管一些修改可能会增加转移的成功率:
新鲜培养物可以在传代时转移到DEF-CS系统中。细胞按前一系统的协议分离,按DEF-CS协议按1:1分裂比例作为单个细胞或聚集细胞进行播种。
低温保存的细胞可以直接解冻到DEF-CS系统。
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