- 心肌细胞(来自ChiPSC22)试剂盒GydF4y2Ba
- Cellartis Cardiomyocytes (from ChiPSC22)GydF4y2Ba
- CM解冻基地GydF4y2Ba
- Cellartis CM培养基地GydF4y2Ba
- 胎牛血清(FBS)(Thermo Fisher Scientific,Cat.#16140063)GydF4y2Ba
- y - 27632GydF4y2Ba
- 纤维连接蛋白(Sigma-Aldrich,目录号F0895)GydF4y2Ba
- Maestro MEA 48孔板(Axion BioSystems, M768-KAP-48)GydF4y2Ba
- 带Ca的PBS Dulbecco'sGydF4y2Ba2+GydF4y2Ba&镁GydF4y2Ba2+GydF4y2Ba(D-PBS+/+)GydF4y2Ba
- 迈斯特罗MEA系统(Axion BioSystems)GydF4y2Ba
- 用于细胞培养实验室的一般细胞培养设备GydF4y2Ba
用户生成协议GydF4y2Ba
Maestro MEA系统上的细胞心肌细胞GydF4y2Ba
Cellartis心肌细胞来源于人类诱导的多能干细胞,为临床前试验和药物筛选提供了一个有前途的生理相关人体模型。Axion BioSystems的Maestro多电极阵列(MEA)平台允许无创检测细胞外场电位(EFP)高通量记录。与Axion BioSystems的MEA技术结合使用的Cellartis心肌细胞证明了准确预测心脏毒性反应和筛选复合疗效的潜力。GydF4y2Ba
所需材料GydF4y2Ba
协议GydF4y2Ba
注:GydF4y2Ba避免接触电极在所有的下列程序,因为它们是非常脆弱的。这些程序应在无菌条件下进行。GydF4y2Ba
对Maestro 48孔板进行涂层GydF4y2Ba
- 将D-PBS+/+中所需体积的纤维连接蛋白稀释至10µg/ml的最终浓度。GydF4y2Ba
- 将8μl/孔的稀释纤维连接蛋白溶液添加到每个孔的中心(电极顶部)。小心不要触摸电极。GydF4y2Ba
注:GydF4y2Ba最好采用快速电镀,以避免涂层干燥。GydF4y2Ba
- 将培养皿置于培养箱中(37℃±1℃,5%COGydF4y2Ba2.GydF4y2Ba和>90%的湿度),持续1-2小时。GydF4y2Ba
准备此协议所需的介质GydF4y2Ba
制备冻融培养基GydF4y2Ba
- 将地窖解冻,并将其置于解冻基座上。GydF4y2Ba
- 用适当的消毒剂清洗所有瓶子的外表面,并将其放入生物安全柜中。GydF4y2Ba
- 每32毫升Cellartis CM解冻基底加入8毫升FBS,制成Cellartis CM解冻培养基。GydF4y2Ba
解冻培养基应在4°C下储存,并在制备日期后一个月过期。GydF4y2Ba
始终丢弃任何剩余的加热过的地窖和解冻介质。GydF4y2Ba
用Y-27632制备CM解冻培养基GydF4y2Ba
- 在使用当天,通过向先前制备的Cellartis CM解冻培养基中添加最终浓度为10μM的Y-27632,用Y-27632制备Cellartis CM解冻培养基。GydF4y2Ba
- 制备当天应使用带有Y-27632的Cellartis CM解冻培养基。GydF4y2Ba
地窖CM培养基的制备GydF4y2Ba
- 解冻地窖培养基。GydF4y2Ba
- 用适当的消毒剂将补瓶、中瓶外表面消毒,放入生物安全柜。GydF4y2Ba
- 每90 ml Cellartis CM培养基中加入10 ml FBS,制成Cellartis CM培养基。GydF4y2Ba
- Cellartis CM培养基应储存在4°C下,并在制备日期后一个月过期。GydF4y2Ba
- 始终丢弃任何剩余的热培养基。GydF4y2Ba
用Y-27632制备细胞CM培养基GydF4y2Ba
- 在使用当天,将Y-27632加入到已准备好的Cellartis CM培养基中,最终浓度为10 μM,即可制成带有Y-27632的Cellartis CM培养基。GydF4y2Ba
- 制备当天应使用带有Y-27632的Cellartis CM解冻培养基。GydF4y2Ba
心肌细胞的解冻和贴壁GydF4y2Ba
笔记:GydF4y2Ba
- 一次解冻的瓶子不要超过两到三瓶。GydF4y2Ba
- 为了保护您,请戴上防护面罩和防护手套。处理冷冻小瓶时使用镊子。切勿将药瓶握在手中,因为温度快速变化可能导致药瓶爆炸。GydF4y2Ba
- 用Y-27632准备适量的Cellartis CM解冻培养基,加热至室温(RT, 15-25℃)。GydF4y2Ba
- 使用镊子将冷冻小瓶从液氮快速转移到37℃±1℃的水浴中。GydF4y2Ba
- 将小瓶轻轻推到水面下,解冻细胞,不要使小瓶旋转。GydF4y2Ba不要将瓶盖浸入水浴中,因为这可能会污染细胞。GydF4y2Ba
- 解冻完成后(约3分钟;小瓶外部仍应为冷的),立即将小瓶从水浴中取出。GydF4y2Ba
- 用适当的消毒剂擦拭药瓶,并将其放入生物安全柜中。GydF4y2Ba
- 尽快用移液管轻轻地将细胞悬浮液移到一个50毫升的无菌试管中。GydF4y2Ba
- 用1毫升含Y-27632的Cellartis CM解冻培养基冲洗每个小瓶,并小心地滴加至细胞悬浮液中。GydF4y2Ba
- 滴加8毫升含Y-27632的Cellartis CM解冻培养基。其间轻轻旋转试管几次。GydF4y2Ba
- 将试管离心至200GydF4y2BaGGydF4y2Ba在RT条件下持续5分钟,并去除上清液。GydF4y2Ba
- 小心地使用带有Y-27632的Cellartis CM解冻培养基重新悬浮细胞颗粒,每个解冻小瓶使用700µl培养基。GydF4y2Ba
- 计数细胞并测定其活力。GydF4y2Ba
- 用Y-27632的Cellartis CM解冻培养基将活细胞数调整为3,125,000个/ml。GydF4y2Ba
- 将细胞种入先前涂覆的48孔板中。GydF4y2Ba
注:GydF4y2Ba抽吸纤维连接蛋白溶液GydF4y2Ba就在加入细胞悬液之前GydF4y2Ba. 一次制备2-4个孔,因为表面干燥可能导致纤维连接蛋白结晶,并随后损坏细胞。在播种每组孔之前,仔细混合细胞悬浮液,并轻轻地将8μl细胞悬浮液移到每个孔的电极顶部(2.5 x 10GydF4y2Ba4.GydF4y2Ba细胞/井)。GydF4y2Ba
- 将培养皿置于培养箱中(37℃±1℃,5%COGydF4y2Ba2.GydF4y2Ba, >90%的湿度),以使细胞沉淀。GydF4y2Ba
- 1-2小时后,小心地向每个孔中添加390μl Cellartis CM解冻培养基和Y-27632,使最终体积达到400μl。GydF4y2Ba
- 将培养皿置于培养箱中(37℃±1℃,5%COGydF4y2Ba2.GydF4y2Ba,以及>90%的湿度)。GydF4y2Ba
改变媒体GydF4y2Ba
我们建议在解冻和电镀后48±5小时进行第一次培养基更换,之后每2-3天更换一次(例如,周一,周三,周五)。GydF4y2Ba
准备培养基GydF4y2Ba
如前所述,用Y27632制备适当体积的Cellartis CM培养基,并在使用前加热至37℃±1℃。GydF4y2Ba
改变媒体GydF4y2Ba
注:GydF4y2Ba轻轻操作,以免分离细胞。GydF4y2Ba
- 用Y-27632的新鲜Cellartis CM培养基替换400 μl。GydF4y2Ba
- 将培养皿置于培养箱中(37℃±1℃,5%COGydF4y2Ba2.GydF4y2Ba,以及>90%的湿度)。GydF4y2Ba
准备在Maestro MEA平台上进行实验GydF4y2Ba
注:GydF4y2Ba药理学实验最好在解冻后的第7-9天进行,或者当t波很明确的时候。GydF4y2Ba
在记录当天,按照上述方法进行完整的培养基更换,但将体积减少至300µl的新鲜Cellartis CM培养基(含Y-27632)。GydF4y2Ba
用户协议GydF4y2Ba
用户生成的协议基于内部概念验证实验、客户协作和已发表的文献。在某些情况下,相关结果将在我们的GydF4y2Ba研究新闻BioView博客文章GydF4y2Ba.虽然我们希望这些协议能够在您的手中获得成功,但它们可能没有得到充分的审查或优化。我们鼓励您联系我们或参考已发表的文献,以获得关于这些用户生成和报告的协议的更多信息。GydF4y2Ba
如果您正在寻找特定于产品的、完全优化的用户手册或协议一览,请访问该产品的产品页面,在价格表中打开该产品的产品详细信息行,然后单击文档。有关查找文件的更详细说明,请参阅我们的GydF4y2Ba网站的faq页面。GydF4y2Ba
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