定量PCR(qPCR)是一种常用的、有效的基因表达精确分析技术。当从RNA样本开始时,您必须首先执行反转录(RT)步骤,为随后的qPCR反应生成cDNA。两步RT-qPCR在一个管中执行RT步骤,在单独的管中执行qPCR反应(图1)。
图1所示。两步RT-qPCR反应示意图。
两步RT-qPCR采用双管工作流程,可以分别优化RT和qPCR步骤,具有最大的灵活性、特异性和效率。两步RT-qPCR在较少样本中分析多个靶标的工作流程中效果最好。另一个优点是,两步RT-qPCR从qPCR反应中分离出cDNA,可以将cDNA储存起来以备将来使用。
两步RT-qPCR有一定的局限性。一般来说,该方案更耗时,涉及更多的移液步骤。这就带来了更多的可变性,增加了污染的风险。此外,虽然单独优化RT和qPCR步骤的能力可以提高灵敏度和效率,但它的缺点是必须优化两个反应而不是一个。最后,双管协议不能很容易地适应自动化、高吞吐量的工作流程,需要更多的动手时间。
我们提供多种格式的两步RT-qPCR试剂盒,以方便、灵活和特异性。所有套件都可以与我们的探测-或TB绿色(我们专有的绿色插层染料)qPCR套件可满足您的实验需求,并为您提供运行各种应用程序的灵活性。