SuperPlex预混料比其他预混料提供更统一的多重PCR扩增
在我们的第一个实验中,我们比较了SuperPlex预混料与其他四种市场上出售的用于多重PCR的主混合料在一个20倍反应中的性能。SuperPlex Premix在所有目标尺寸中获得了最均匀的扩增(20个来自人体的扩增子)雌性生殖道基因范围为70-697 bp),每个靶标在凝胶上都清晰可见(图1,1巷)。另外三种主混合物——kapa(2巷)、Invitrogen(3巷)和Qiagen(5巷和6巷)在两种反应条件下也能扩增所有20个靶标。然而,不同引物对的扩增并不均匀,大靶标和小靶标扩增较弱。NEB的多路主混合(4巷)无法进行20路反应。
除了提供最均匀的扩增,SuperPlex预混料需要最小的优化,可以扩增反应中的所有20对引物。
车道 |
预混料 |
米 |
分子量标记(50 - 2000 bp) |
1 |
SuperPlex预混料 |
2 |
快速复用混合 |
3. |
Invitrogen Platinum Multiplex PCR Master Mix |
4 |
NEB Multiplex PCR 5X Master Mix |
5 |
Qiagen多重PCR试剂盒,不含Q-solution |
6 |
Qiagen多重PCR试剂盒,Q-solution |
图1所示。用SuperPlex预混料均匀扩增20 plex反应。每个多重PCR都是在制造商推荐的PCR循环和条件下进行的,每个lane代表从不同预混料和中获得的PCR产品溴化乙锭染色可见.看到的方法表二世对于引物对和表3实验1 PCR循环条件.
SuperPlex预混料比其他多重PCR预混料提供更快的结果
因为多重PCR是专门为了以一种有效的方式获得大量数据,所以我们在设计SuperPlex预混料时考虑了总检测时间,最大限度地缩短了反应设置时间和检测结果的总时间。当比较供应商的循环条件时,SuperPlex预混料具有最短的PCR循环时间,与每个竞争对手预混料相比节省了大量时间(表1),并且表现优异,如图1所示。
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SuperPlex预混料 |
快速复用混合 |
Invitrogen Platinum Multiplex PCR Master Mix |
NEB Multiplex PCR 5X Master Mix |
Qiagen多重PCR试剂盒,不含Q-solution |
Qiagen多重PCR试剂盒,Q-solution |
#推荐PCR循环 |
30. |
30. |
30. |
30. |
35 |
35 |
总推荐周期
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18分30秒 |
48分钟 |
92分钟 |
71分钟 |
137分30秒 |
137分30秒 |
表1 .制造商推荐的每种多重PCR预混料的PCR循环时间。SuperPlex预混料的推荐多重PCR循环时间最短。
为了减少测试时间,每个主混合在20个plex中测试雌性生殖道使用SuperPlex预混料推荐的更短的PCR循环条件进行检测。图2的结果显示了SuperPlex预混料的优越性能:NEB和Qiagen主混合料未能产生扩增产物(Lanes 4-6),而KAPA2G和Invitrogen主混合料的强度、涂片和扩增缺失降低(Lanes 2 - 3)。
车道 |
酶 |
米 |
分子量标记(50 - 2000 bp) |
1 |
SuperPlex预混料 |
2 |
快速复用混合 |
3. |
Invitrogen Platinum Multiplex PCR Master Mix |
4 |
NEB Multiplex PCR 5X Master Mix |
5 |
Qiagen多重PCR试剂盒,不含Q-solution |
6 |
Qiagen多重PCR试剂盒,Q-solution |
图2。使用SuperPlex预混料成功扩增20倍PCR, PCR周期短,但没有其他多倍主混合。我们使用上文所述的短(SuperPlex预混料)PCR循环条件,将SuperPlex预混料与其他四种多重PCR主混合料的性能进行了比较表4.每个通道代表从不同预混料中获得的20个复杂反应的PCR产物,用溴化乙锭染色可见。