纯化方案是基于在含盐的朝性缓冲液中使用蛋白酶K孵育对血浆样品进行裂解。在最初的裂解步骤之后,将结合缓冲液添加到样品中,并将裂解液装载到结合柱上。在装载和真空过滤驱动DNA与二氧化硅膜结合后,通过几个洗涤步骤去除杂质,在最后的干燥步骤后洗脱cfDNA(图1)。
![核旋蛋白等离子体Midi程序:干燥步骤](http://www.yamajr.com/learning-centers/nucleic-acid-purification/genomic-dna-purification/images/Data%20Image/NS_DNA_Plasma_Midi_VacSetup2.png)
![核自旋等离子体Midi程序:结合和洗涤步骤](http://www.yamajr.com/learning-centers/nucleic-acid-purification/genomic-dna-purification/images/Data%20Image/NS_DNA_Plasma_Midi_VacSetup1.png)
![核旋蛋白等离子体Midi程序:洗脱步骤](http://www.yamajr.com/learning-centers/nucleic-acid-purification/genomic-dna-purification/images/Data%20Image/NS_DNA_Plasma_Midi_VacSetup3.png)
图1. Nucleospin CFDNA MIDI程序。
NucleoSpin cfDNA Midi
NucleoSpin cfDNA Midi专为使用真空过滤从高达5毫升血浆快速制备高纯度细胞游离DNA而设计。真空过滤技术的应用消除了繁琐的离心步骤和过程中柱的人工处理(例如,处理收集的柱流)。将NucleoSpin cfDNA Midi与NucleoVac 96真空歧管和Starter Set Midi组合,可在约90分钟内并行处理多达24个样品。
纯化方案是基于在含盐的朝性缓冲液中使用蛋白酶K孵育对血浆样品进行裂解。在最初的裂解步骤之后,将结合缓冲液添加到样品中,并将裂解液装载到结合柱上。在装载和真空过滤驱动DNA与二氧化硅膜结合后,通过几个洗涤步骤去除杂质,在最后的干燥步骤后洗脱cfDNA(图1)。
图1. Nucleospin CFDNA MIDI程序。
使用NucleoSpin cfDNA Midi试剂盒从2ml人EDTA血浆中分离cfDNA,与竞争对手试剂盒进行比较(图2)。
图2。从2ml人EDTA血浆中高效分离cfDNA。将CFDNA与单独的EDTA血浆样品分离出核磷酸核蛋白酶样品和来自竞争对手(竞争对手Q)的真空基试剂盒。通过QPCR定量DNA产率(QualifileIFILER人DNA定量试剂盒,Thermo Fisher Scientific在应用的生物系统7500实时PCR系统,Thermo Fisher Scientific)。对于每个处理的样品,Nucleospin CFDNA MIDI提供了大于或与来自竞争对手Q的试剂盒获得的产率大的DNA产率。
Nucleospin CFDNA MIDI试剂盒提供了类似于用无细胞DNA BCT(“STRECK管”)和EDTA管的血液样品的CFDNA的相似产率,这是由于“STRECK管”的方案的优化(图3)。
图3。从无细胞DNA BCT(“Streck Tubes”)中分离cfDNA的优化方案。从五个独立的测试对象中抽取血液并使用无细胞DNA BCT(“STRECK管”)和EDTA管保留。使用Nucleospin CFDNA MIDI套件从两管类型保存的样品中分离CFDNA。EDTA管和“STRECK管”的CFDNA产量相似。通过QPCR定量DNA产率(QualifileIFILER人DNA定量试剂盒,Thermo Fisher Scientific在应用的生物系统7500实时PCR系统,Thermo Fisher Scientific)。
技术 | 硅膜 |
格式 | Midi旋转列 |
起始物料 | 1 - 5毫升血浆 |
抽血管 | EDTA,无细胞DNA BCT(STRECK) |
片段大小 | ≥50bp. |
典型的产量 | 根据样本源,存储和质量而变化 |
洗脱体积 | 200µl(最终洗脱体积140µl) |
准备时间 | 90分钟/24份(EDTA血浆) |
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