慢病毒颗粒的概述
我们已经与Vectalys合作,提供现成的慢病毒颗粒,用于涉及tet诱导表达或荧光记者. 我们相信,由于Vectalys独特的生产高纯度、高滴度、性能优越的颗粒的方法,这些是目前可用的质量最高的现成慢病毒颗粒。
您可以从Vectalys获得慢病毒颗粒:
- 100%转导许多原代细胞(包括神经元、内皮细胞和干细胞)
- 在高MOI条件下在原代细胞中高表达
- 无细胞毒性作用
- 功能性滴度——不仅仅是粒子计数
Vectalys生产的慢病毒颗粒和我们销售的有什么不同?
不像从其他供应商准备使用的慢病毒颗粒,在我们的目录中的颗粒是通过多步骤纯化过程产生的,结果是非常高滴度和高纯度。高滴度提高了转导效率,高纯度降低了细胞毒性,因此可以成功地转导大量不同类型的细胞,包括原代细胞、永生化细胞、贴壁细胞和悬浮细胞,并保持较高的细胞活力。
最先进的慢病毒生产平台
Vectalys公司开发了一种生产高滴度病毒上清液的独特方法。这一过程包括在无血清的培养基中在293T细胞中生成病毒,然后进行背对背切向超滤和过滤,以浓缩和净化颗粒。最后,在对RCL进行滴定和分析之后,安全、高滴度、高纯度的慢病毒载体就可以用于细胞的转导了。
![产生高滴度慢病毒颗粒的方法](http://www.yamajr.com/learning-centers/gene-function/viral-transduction/lentivirus/images/383-Lentivirus/CC-TechFigs/LENTIPART_BSC01_95882.gif)
图1所示。高滴度慢病毒粒子生成过程概述。通过这一专有的大规模过程,Vectalys能够产生非常高滴度、高纯度的慢病毒,为多种不同细胞类型的转导做好准备。
我们提供功能性滴度,而不仅仅是颗粒计数
不是所有的广告滴度都是一样的!大多数现成的病毒颗粒供应商使用简单的颗粒计数来确定它们的滴度。该计数将包括游离衣壳蛋白、非功能性和未成熟病毒粒子以及功能性病毒。对于我们的每一个慢病毒颗粒,我们提供一个功能效价大于1 x 109每毫升转导单位(TU/ml)。功能效价为不仅仅是粒子总数;它是对病毒粒子总数的测量能够整合到细胞中。与其他供应商的滴定法相比,Vectalys的方法确保了功能颗粒的准确计数。实际上,这意味着我们的病毒制剂含有的传染性颗粒比其他供应商的制剂多100倍。
图2.表达Vectalys GFP的慢病毒载体在IMR90细胞中的转导效率。即使在MOI为5的情况下,95%以上的细胞使用这种高滴度慢病毒进行转导。通过增加MOI可以实现非常高的表达。
为什么滴度和纯度很重要?
高滴度提高慢病毒转导的速度、容易和效率。较高的慢病毒滴度允许你以较低的MOI有效感染甚至难以转导的细胞类型。高纯度的慢病毒颗粒极大地降低了细胞毒性,进一步提高了微妙细胞的转导效率。
图3。用Vectalys方法或经典纯化方法产生的慢病毒纯度的比较。比较两种方法时,载体慢病毒颗粒的纯度很高;即使载体颗粒的装载量比载体颗粒高10倍,也几乎看不到污染蛋白质。
无血清培养基的原因吗?
在无血清培养基中生产大大提高了慢病毒作为基因传递载体的质量:从慢病毒上清中消除血清可以减少在纯化过程中需要去除的污染蛋白的水平。这可以增加滴度(TU/ml),降低物理颗粒与转导单位比(PP/TU;Vectalys颗粒比无效颗粒更有效),并提高了病毒制备液的转导效率。Vectalys颗粒的纯度高于经典的超离心法浓缩的颗粒——即使在Vectalys颗粒的浓度高出10倍的情况下。
产品由Takara Bio提供
用于Tet诱导基因表达的病毒颗粒
我们提供现成的慢病毒颗粒,以引入Tet-On 3 g反式激活因子在你选择的细胞里。在强力霉素(四环素衍生物)存在下,Tet-On-3G反式激活子结合并激活PTRE3G发起人。这使你能够精确地控制克隆到细胞下游的任何基因的转录PTRE3G.了解更多»
用于亚细胞定位研究的病毒颗粒
组成型慢病毒报告载体是预先包装的慢病毒颗粒,可将荧光蛋白靶向于特定的细胞器或亚细胞结构。这些颗粒可以用来创建报告细胞系,用于研究活细胞或细胞骨架和细胞器的结构和功能蛋白质定位研究。了解更多»
用于制备预包装的高浓度慢病毒颗粒的表达质粒示意图。点击图片查看更大的版本。
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