关于Xfect蛋白转染试剂的常见问题
快速、高效、低毒的蛋白转染
- 转染大量活性蛋白
- 实际上没有细胞毒性,不像脂效作用
- 非常高的效率,即使在干细胞或造血细胞
- 只需两小时就能检测出你的蛋白质
这蛋白转染试剂利用Takara Bio开发的细胞穿透肽,将活性蛋白直接结合和运输到各种哺乳动物细胞中,包括难以转染的人类悬浮细胞系和小鼠胚胎干细胞。
什么是XFECT蛋白转染试剂以及它如何工作?
Xfect蛋白转染试剂是一种经过修饰的肽,具有穿透细胞的活性,其氨基酸组成使其能够与蛋白质货物相互作用,并运输该蛋白质穿过细胞膜屏障。只需将您感兴趣的蛋白质与Xfect在提供的缓冲液中孵育30分钟,然后将混合物应用于您的细胞- 2小时后,您就可以检测蛋白质活性了。
![Simple, rapid protein transfection with Xfect Protein Transfection Reagent. 用XFECT蛋白转染试剂简单,快速蛋白质转染。](http://www.yamajr.com/learning-centers/gene-function/transfection-reagents/images/370-Transfection/CC-TechFigs/Xfect_Simple_rapid_01_T.jpg)
用XFECT蛋白转染试剂简单,快速蛋白质转染。Xfect的细胞穿透活性使蛋白质能够穿过哺乳动物细胞的细胞膜。
为什么直接转染纯蛋白?
与使用转染DNA的传统基因表达研究相比,蛋白质转染极其迅速(1-2小时比18-48小时),因为它绕过了细胞的转录和翻译过程。它还有助于研究蛋白质的瞬时效应,并避免潜在有害的随机DNA整合到目标细胞的基因组中。Xfect蛋白转染试剂可将活性蛋白直接导入细胞,用于涉及转录调控、细胞周期、凋亡、肿瘤发生、表观遗传学、细胞再生和转分化等研究。
![Complete induction of an early apoptosis event within 2 hours via protein transfection of active caspase-3. 通过蛋白转染活性caspase-3在2小时内完全诱导早期凋亡事件。](http://www.yamajr.com/learning-centers/gene-function/transfection-reagents/images/370-Transfection/CC-TechFigs/Xfect_Complete_induc_01_T.jpg)
通过蛋白转染活性caspase-3在2小时内完全诱导早期凋亡事件。细胞凋亡通常通过膜联蛋白V-FITC染色检测(见我们的ApoAlert Annexin V-FITC凋亡试剂盒,猫。# 630109),它检测细胞凋亡诱导后不久磷脂酰丝氨酸从质膜的内部(细胞质)叶向外部(细胞表面)叶的移位。Annexin V-FITC染色通过流式细胞术检测荧光强度的增加(面板A.和B.).我们使用Xfect蛋白转染试剂转染人重组caspase-3,并在仅仅2小时后检测到凋亡完成,证明使用Xfect蛋白试剂转染蛋白既快速又传递活性蛋白(面板B).相比之下,其他诱导细胞凋亡的方法需要12小时才能完成Annexin V染色(Martin et al. 1995)。
参考
王志强,王志强等。细胞质膜磷脂酰丝氨酸的早期再分配是细胞凋亡的一个普遍特征,无论启动刺激是什么:过度表达Bcl-2和Abl的抑制。J. Exp。Med。182,1545-56(1995)。
XFECT转染试剂与其他蛋白质递送技术相比有哪些优点?
两种最常用的蛋白质传递技术是基于脂质和细胞穿透肽的。脂基试剂转染细胞毒性高,而肽基试剂转染效率低。Xfect蛋白转染试剂提供了两者的最佳优势(即,它保持低细胞毒性,并提供更多的蛋白到更高比例的靶细胞)。此外,这种试剂可以转染比竞争产品生长密度更高的细胞,这很重要,因为检测通常在转染后几小时内进行,较高的细胞密度确保了下游分析的足够材料。
转染的蛋白是否有活性?
是的,蛋白质是活性的。检测酶活性(如caspase-3或β-半乳糖苷酶)的试验表明,用Xfect蛋白转染试剂转染后,这些蛋白保持活性,而荧光蛋白保持荧光能力。
![Xfect Protein Transfection Reagent delivers up to 8X more active β-galactosidase Xfect Protein转染试剂提供多达8倍的活性β-半乳糖苷酶](http://www.yamajr.com/learning-centers/gene-function/transfection-reagents/images/370-Transfection/CC-TechFigs/Xfect_Galactosidase_02_T.jpg)
Xfect Protein转染试剂提供高达8倍的活性β-半乳糖苷酶进入HeLa细胞,比领先的竞争对手,产品c。XFECT蛋白转染试剂或产物C根据制造商推荐的协议使用各种量的β-半乳糖苷酶(β-GAL)转染Jurkat细胞。转染后一小时,使用我们的β-加仑活动测定细胞荧光β-半乳糖苷酶检测试剂盒(猫。# 631712)。Xfect蛋白转染试剂显示β-gal信号远高于C产品。面板B.用Xfect蛋白转染试剂(中图)转染4 μg β-gal的HeLa细胞比用C产品(右图)转染效率更高,β-gal蛋白的含量也更高。
Xfect蛋白转染试剂是否提供了大量的蛋白质?
是的,Xfect.在广泛的细胞类型中,Protein转染试剂提供比领先的蛋白转染试剂(Product C)多得多的蛋白质。这在我们比较β-半乳糖苷酶以及由每种试剂传递的荧光蛋白。当我们比较六种不同的细胞类型时,Xfect.其他蛋白递送试剂的最大缺点是它们对蛋白质的生物学效应的监测能力有限(由于无法递送足够的活性蛋白)。Xfect.与其他试剂相比,蛋白质在每个细胞中提供更多的蛋白质,因此它应该扩大蛋白质传递的应用范围和/或允许您使用更少的蛋白质进行转染。
![Xfect Protein Transfection Reagent delivers more recombinant fluorescent proteins than Product C into a range of cell types Xfect蛋白转染试剂递送多种重组FL uorescent蛋白比产品C到一系列细胞类型中](http://www.yamajr.com/learning-centers/gene-function/transfection-reagents/images/370-Transfection/CC-TechFigs/Xfect_Product_C_03_T.jpg)
Xfect.蛋白转染试剂提供比产品C更多的重组荧光蛋白到一系列的细胞类型。Xfect.用蛋白转染试剂和C产品转染多个细胞系纯净重组荧光蛋白(RACGFP1或RDSRED-EXPRESS)。在测试的所有细胞系中,通过流染后通过流动仪检测到更大的MFI(平均荧光强度)Xfect.蛋白转染试剂比C产品转染后的蛋白转染试剂多。
Xfect蛋白转染试剂是否影响细胞活力?
不,我们进行了WST-1实验,比较了Xfect蛋白转染试剂和产品P(一种流行的脂基蛋白转染技术)对HeLa细胞增殖的影响。与未处理细胞相比,Xfect试剂对细胞增殖无影响,而P产品使细胞增殖降低30%以上。当我们用Xfect蛋白转染试剂将红色荧光蛋白DsRed-Express转染到常用的小鼠胚胎干细胞系,并排除台台蓝染料测定细胞活力时,细胞活力保持100%。
![Xfect Protein Transfection Reagent provides much higher cell viability Xfect蛋白转染试剂提供更高的细胞活力](http://www.yamajr.com/learning-centers/gene-function/transfection-reagents/images/370-Transfection/CC-TechFigs/Xfect_Product_P_04_T.jpg)
Xfect蛋白转染试剂在转染HeLa细胞时,细胞活力明显高于P产品。HeLa细胞接种于96孔板(3 × 10)4.每孔细胞)。用产物P或Xfect蛋白转染试剂用0.25 μg β-半乳糖苷酶转染细胞4小时。通过WST-1增殖试验来评估转染样本相对于未处理HeLa细胞的细胞毒性。
![Cytotoxicity is undetectable in mouse embryonic stem cells 在小鼠胚胎干细胞中检测不到细胞毒性](http://www.yamajr.com/learning-centers/gene-function/transfection-reagents/images/370-Transfection/CC-TechFigs/Xfect_Cytotoxicty_05_T.jpg)
在小鼠胚胎干细胞中检测不到细胞毒性。1、2.5或5 μg重组红色荧光蛋白(rDsRed-Express)高效转染E14TG2a mES细胞。通过染料排除试验测定了细胞的相对活力,结果表明,与未转染细胞对照(仅转染细胞)和阴性(无试剂)对照(在没有任何转染试剂的细胞中加入5 μg rDsRed-Express)相比,细胞保持了100%的活力。
xeffect蛋白转染试剂的转染效率如何?
XFECT蛋白转染试剂的转染效率可以根据细胞类型和蛋白质递送而变化。但是,在所有测试的细胞系中,XFECT蛋白优于产物C.当我们使用XFECT蛋白转染acgfp1(绿色荧光蛋白)进入几种不同的细胞类型并使用流动细胞测定测量的转染Ef效率,超过90%的细胞在四个中转染的是,我们测试了八个信元类型,和八个七的显示超过80%的转染EF法fi ciency(图A)。当使用XFECT蛋白和产物C(领先竞争对手)使用免疫流荧光显微镜将ACGFP1转染的EF效率与HeLa细胞进行比较时,仅针对用XFECT蛋白转染试剂(Ban B)处理的细胞观察到高水平的转染。
![Protein transfection efficiencies across different cell lines 不同细胞系的蛋白转染效率](http://www.yamajr.com/learning-centers/gene-function/transfection-reagents/images/370-Transfection/CC-TechFigs/Xfect_Efficiencies_06_T.jpg)
不同细胞系的蛋白转染效率:Xfect Protein转染试剂与主要竞争对手Product c。Xfect蛋白转染试剂在广泛的哺乳动物细胞中具有比Product C更高的转染效率,包括一些啮齿动物和人类细胞系,难以转染的人类悬浮细胞,以及小鼠胚胎干细胞。根据制造商推荐的方案,使用Xfect蛋白转染试剂或C产品转染4 μg重组荧光蛋白(rAcGFP1或rDsRed-Express)。转染1小时后用流式细胞仪检测转染效率。面板B.使用产品C或XFECT蛋白转染试剂用5μgRACGFP1转染HELA。
Xfect蛋白转染试剂是否适用于所有类型的细胞,包括不容易转染DNA的细胞类型?
目标单元格的选择不受限制。我们成功高效转染了多种哺乳动物细胞类型(人和啮齿动物),包括难以转染的人悬液细胞系(Jurkat, HL-60),转染效率接近100%。当使用Xfect蛋白转染试剂时,小鼠ES细胞(E14TG2A)以惊人的87%的效率转染,尽管它们不能使用来自领先竞争对手的产品C进行转染(更多细节见“Xfect蛋白转染试剂的转染效率是什么?”)
![Xfect Transfection Reagent yields extremely high transfection efficiencies Xfect转染试剂具有极高的转染效率](http://www.yamajr.com/learning-centers/gene-function/transfection-reagents/images/370-Transfection/CC-TechFigs/Xfect_Jurkat_07_T.jpg)
即使在HL-60或Jurkat等难以转染的人悬浮细胞系中,Xfect转染试剂也能产生极高的转染效率。
XFECT蛋白转染试剂是否适用于所有蛋白质?
因为每一种蛋白质都有其独特的理化特性,所以不可能有任何一种蛋白质转染试剂都能转染所有的蛋白质。然而,Xfect蛋白转染试剂已经成功转染了众多分子量和理化特性各异的蛋白质。我们成功转染的蛋白有ß-半乳糖苷酶,荧光蛋白如rAcGFP1和rDsRed-Express,抗α微管蛋白抗体,caspase-3, r - phycoythrin。r藻红蛋白是一种非常大的蛋白(~ 240kda)。优化试剂和蛋白质的比例将允许您确定合适的条件,以交付您感兴趣的蛋白质。
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