iDimerize系统期刊俱乐部
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放一个开关在上面……
想象,独立于上游信号激活感兴趣的特定信令路径!Idimerize系统是一种强大的技术,用于产生可以在添加小分子配体的几秒钟内激活的条件等位基因。
在使用Idimerize技术的许多出版物中,我们选择了一些突出显示。单击每个研究摘要。
使用二聚体技术的出版物
小鼠前列腺FGFR的二聚体化和活化
研究总结
iDimerize诱导homodimerization该技术用于分析哺乳动物成纤维细胞生长因子受体(FGFR)亚类成员在小鼠前列腺增生中的作用。作者指出,诱导FGFR1信号而不是FGFR2信号导致前列腺增生。
论文:弗里曼,k W。et al。条件性fgfr1表达小鼠中可诱导的前列腺上皮内瘤变伴可逆性增生癌症Res。63年,8256 - 63(2003)。
诱导二聚的优点
- 激活一个特定的FGFR
- 在任何发育时间点诱导
- 去除配体以研究表型可逆性
- 比creo -lox或调控转录系统更容易设置
实验设计
在前列腺特异性启动子的控制下,创建了带有可诱导的FGFR1和FGFR2转基因的小鼠。每个结构体编码一个膜靶向序列、FGFR的酪氨酸激酶结构域和两个拷贝DmrB域,哪一个二聚体B / B结伴配体.*
*研究采用二聚体成分。完整的实验细节,请参阅原始出版物。融合域的最佳位置和拷贝数在每个研究中都是不同的,必须通过经验来确定。
关键结果
- 经过两周的常规注射配体后,只有具有异位FGFR1信号传导的小鼠发育了前列腺特异性增生。在两个污渍中证实受体酪氨酸磷酸化,表明表型差异是由于FGFR活化下游的信号事件。
- 作者在不同的时间点停止了配体治疗,以观察FGFR1信号是否对维持增生是必需的。他们了解到在广泛的新生血管形成之前,增生是可逆的,这为前列腺癌的早期干预提供了机会。
哺乳动物Rho GTPase的招募和激活
研究总结
iDimerize诱导heterodimerization研究了Rho GTPase Cdc42在肌动蛋白聚合调控中的作用。作者表明,诱导Cdc42向膜募集足以产生肌动蛋白为基础的膜突出。
论文:Rac1的膜募集引发吞噬作用。j .细胞科学。2955-61(2000)。
诱导二聚的优点
- 激活一个特定的GTPase通路
- 避免相关途径之间的交叉
- 消除对上游刺激的需求
- 隔离和研究瞬态信令事件
实验设计
在大鼠嗜碱性白血病(RBL-2H3)细胞中建立了一个将Cdc42招募到质膜的诱导系统。一式两份DmrA域用信号序列固定在细胞膜上。Cdc42的胞质结构活性表达融合到aDMRC域,使质膜上的诱导易位的A / C二聚化配体增长的媒体。*
*研究采用二聚体成分。完整的实验细节,请参阅原始出版物。融合域的最佳位置和拷贝数在每个研究中都不同,必须通过实验确定。
关键结果
- Cdc42在膜上的定位募集足以产生肌动蛋白为基础的膜突出的标志性表型。
- 一项平行研究表明,Rac1的膜募集通过吞噬作用触发肌动蛋白依赖的粒子内化(Castellano, F. 2000)。
FasR活化和小鼠巨噬细胞凋亡
研究总结
iDimerize诱导homodimerization技术用于重新绕过Fas依赖性凋亡途径,并产生能够有条件巨噬细胞消融的转基因小鼠。作者表明,诱导的Fas受体(FasR)寡聚化导致系统性巨噬细胞凋亡。
论文:表达fas基自杀基因的转基因小鼠的条件性巨噬细胞消融。j . Leukoc。医学杂志。75年,612-623(2004)。
诱导二聚的优点
- 归纳法是系统的、可逆的
- 在任何发育阶段诱导
- 去除配体以研究表型可逆性
实验设计
巨噬细胞特异性启动子控制下的转基因Mafia (Macrophage Fas-induced apoptosis)小鼠被创造。介导DISC组装的FasR细胞质区与两个拷贝融合DmrB域和一个膜靶向区域。腹腔注射fscr诱导fscr寡聚B / B结伴配体.*
*研究采用二聚体成分。完整的实验细节,请参阅原始出版物。融合域的最佳位置和拷贝数在每个研究中都不同,必须通过实验确定。
关键结果
- 注射配体的Mafia小鼠在治疗第5天巨噬细胞损失70-95%。
小鼠胱天冬酶活化和脂肪细胞凋亡
研究总结
iDimerize诱导homodimerization利用技术重新连接细胞凋亡通路,产生有条件消融脂肪细胞的转基因小鼠。作者表明,诱导caspase-8二聚导致全身脂肪凋亡。
论文:Pajvani,U. B.et al。caspase 8靶向激活脂肪细胞凋亡:一种新的小鼠诱导和可逆脂肪萎缩模型。Nat,地中海。11,797-803(2005)。
诱导二聚的优点
- 归纳法是系统的、可逆的
- 缺乏本构模型的毒性
- 在任何发育阶段诱导
- 去除配体以研究表型可逆性
实验设计
在脂肪细胞特异性启动子的控制下,构建转基因小鼠fat - attac(靶向激活caspase-8的脂肪凋亡)。人caspase-8的催化结构域与aDmrB域和一个膜靶向区域。腹腔注射半胱天冬氨酸诱导Caspase-8二聚B / B结伴配体。*
*研究采用二聚体成分。完整的实验细节,请参阅原始出版物。融合域的最佳位置和拷贝数在每个研究中都是不同的,必须通过经验来确定。
关键结果
- 接受配体注射的fat - attac小鼠在治疗7天内显示白色和棕色脂肪减少,脂肪细胞特异性标志物脂联素和抵抗素显著下降。
- 在第十周的治疗中,小鼠平均体重减少了12%。
- 停止治疗2个月内表型恢复正常。
pip2介导的质膜离子通道门控
研究总结
iDimerize诱导heterodimerization技术被用来理解磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(PIP)的作用2)通过磷脂酶C(PLC)的水解,在介导KCNQ离子通道闭合。作者表明了诱导的皮点2耗尽就足以关闭KCNQ通道,而不需要其他与plc相关的信号分子。
论文:SUH,B.-C.,Leal,K.&Hile,B。通过膜磷脂酰肌醇4,5-双磷酸磷酸盐调制高压活性Ca(2+)通道。神经元67年,224 - 38年(2010)。
诱导二聚的优点
- 允许有针对性的酶招募
- 快速诱导动力学(秒)
- 去除配体以研究表型可逆性
实验设计
创造了消耗PIP的人胚胎肾tsA-201细胞2使用肌醇聚磷酸5-磷酸酶(Inp54p),从而避免了PLC下游产生的其他信号分子。酵母Inp54p与aDmrA域和蓝荧光蛋白(CFP)。一个DMRC域名使用信号序列锚定在膜上,在添加时允许诱导INP54P招募A / C二聚化配体对增长型媒体。一个黄色荧光蛋白(YFP)标记的pleckstrin同源(PH)结构域,自然结合膜磷脂酰肌醇脂,被用作PIP的传感器2水平。*
*研究采用二聚体成分。完整的实验细节,请参阅原始出版物。融合域的最佳位置和拷贝数在每个研究中都是不同的,必须通过经验来确定。
关键结果
- 在配体存在的情况下,观察到Inp54p在膜上的积累和荧光传感器的同时释放,证实了PIP2在膜上耗尽。
- 配体处理也引起KCNQ电流的完全可逆抑制,证明PIP2耗尽就足以关闭KCNQ频道。
糖尿病小鼠胰岛素分泌与血糖调节
研究总结
形式化诱导型反向二聚体技术被用来创建一个有条件的输出系统,通过内质网(ER)控制胰岛素的分泌。作者显示在高血糖小鼠中胰岛素和葡萄糖的快速和可逆调节。
论文:罗林斯,c . T。et al。用于控制蛋白质相互作用的配体可逆二聚体系。Proc。国家的。学会科学。美国的一个。97年,7096 - 101(2000)。
诱导二聚的优点
- 快速(以秒计)和可逆感应
- Plasma-stable配体诱导物
- 使用内源性出口机械
- 消除对上游刺激的需求
实验设计
携带可诱导胰岛素分泌转基因的工程细胞被移植到高血糖小鼠体内。转基因表达的人胰岛素原融合到四个拷贝DmrD域(两份见图)。在反式高尔基体中,呋喃切割序列允许去除融合域,并释放生物活性蛋白。在没有D / D增溶剂配体,的DmrD域自聚集,导致货物对ER出口来说太大。配体处理可溶解聚集体,使其输出
*研究采用二聚体成分。完整的实验细节,请参阅原始出版物。融合域的最佳位置和拷贝数在每个研究中都是不同的,必须通过经验来确定。
关键结果
- 配体处理的细胞表现出剂量依赖性的胰岛素释放。
- 在治疗后30分钟观察胰岛素分泌,并在停止治疗后1小时完全终止。
- 在给药15分钟后,高血糖小鼠表现出胰岛素和葡萄糖水平的快速调节。
诱导小胶质细胞凋亡研究视网膜变性
研究总结
小胶质细胞在慢性退行性疾病中起重要作用。的二聚化诱导同二聚体体系用于特异性消耗骨髓来源的小胶质细胞。这使得研究人员能够在视网膜变性小鼠模型中明确界定视网膜小胶质细胞和脑母细胞衍生的小胶质细胞的作用。
论文:王,n k。et al。Goldmann-Favre综合征小鼠模型中眼底高自体荧光斑的起源及其在视网膜变性中的作用分离模型。动力机械。6,1113-22(2013)。
诱导二聚的优点
- 在适当的发育阶段特异性诱导细胞凋亡
- 归纳法是系统
- 比其他诱导系统更容易设置
- 同源化器不会穿过血脑屏障;细胞凋亡在特定细胞的特定子集中诱导
实验设计
转基因rd7小鼠(视网膜变性模型)中含有巨噬细胞fas诱导细胞凋亡的转基因。二聚体诱导小胶质细胞凋亡B / B结伴*。采用流式细胞术(FACS)检测小胶质细胞耗竭。免疫组织学观察小胶质细胞的形态和分布变化。采用RT-qPCR检测细胞因子表达。
*研究采用二聚体成分。完整的实验细节,请参阅原始出版物。融合域的最佳位置和拷贝数在每个研究中都是不同的,必须通过经验来确定。
关键结果
- 脑转移衍生小胶质细胞的缺失会增强炎症通路,加速视网膜退化。这也会导致视网膜莲座减少和脾脏增大。
- 视网膜小胶质细胞释放炎性细胞因子-IL-1Beta,IL-6和TNF-α。这些细胞因子增加了视网膜变性。
- B / B同源化器没有穿透血脑屏障,这导致了脑基质来源的小胶质细胞的特异性耗竭,并保留了视网膜小胶质细胞。
Juxtamembrane地区在Delta EGFR核定位中的作用
研究总结
ΔEGFR/EGFRvIII如何转移到细胞核并调节基因表达?的二聚化诱导同二聚体体系研究了近膜区域在ΔEGFR核定位中的作用。作者表明ΔEGFR的核易位对其致瘤潜能至关重要,而不依赖于其激酶活性。
论文:Gururaj a E。et al。ΔEGFR/EGFRvIII的全部致癌潜力需要进入细胞核和与c-Myc的功能关联。生物。化学。288年,3428 - 38年(2013)。
诱导二聚的优点
- 在任何发育阶段诱导
- 归纳法是系统的、可逆的
- 特别激活二聚化依赖的激酶活性
实验设计
产生稳定表达ΔEgFR的细胞系具有Juxtamembrane区(ChiΔegfr-N1s1)的突变。在这些线中,具有NLS1突变的ΔEgFR(核定位减少)融合到两个副本DmrB域。使用诱导二聚化B / B结伴*并观察chiΔEGFR-NLS1的激酶活性和定位。
*研究采用二聚体成分。完整的实验细节,请参阅原始出版物。融合域的最佳位置和拷贝数在每个研究中都是不同的,必须通过经验来确定。
关键结果
- chiΔEGFR-NLS1突变体的激酶活性随着核定位的减少而增加,二聚体的激活。这表明,在胶质母细胞瘤细胞中,ΔEGFR的激酶活性和核定位是独立的。
- ΔEgFR的核定位丧失降低了小鼠中的肿瘤生长。即使激酶活性增加两周的二聚,ΔEgFR致瘤效应也在没有定位的情况下衰减。
- 使用ChIP-seq,在更多的ΔEGFR结合位点中发现了c-Myc结合位点(E-box motif)。c-Myc/ΔEGFR基因的下调被发现与降低致瘤潜能同时发生。
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