CRISPR/Cas9系统简介
一个强大的方法,工程您的兴趣基因
虽然最近开发的可编程编辑工具,如锌指核酸酶和转录激活因子样效应核酸酶,已经显著提高了精确基因组修饰的能力,但这些技术有局限性。CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas9技术代表了相对于这些其他下一代基因组编辑工具的重大改进,达到了一个新的定位、效率和易用性水平。CRISPR/Cas9系统允许在几乎任何生物体中进行位点特异性基因组靶向。
II型CRISPR/Cas系统是一种原核自适应免疫应答系统,使用非编码rna引导Cas9核酸酶诱导位点特异性DNA切割。这种DNA损伤是通过细胞DNA修复机制修复的,可以通过非同源端连接DNA修复途径(NHEJ)或同源导向修复途径(HDR)。
CRISPR/Cas9系统已被用来创建一种简单的、rna可编程的方法来介导哺乳动物细胞中的基因组编辑,并可用于产生基因敲除(通过插入/删除)或敲入(通过HDR)。为了制造基因中断(图1),产生一个单一的引导RNA (sgRNA)来引导Cas9核酸酶到特定的基因组位置。cas9诱导的双链断裂通过NHEJ DNA修复途径修复。这种修复是容易出错的,因此插入和删除(INDELs)的引入可能会破坏基因功能。
![CRISPR / Cas9-mediated基因破坏](http://www.yamajr.com/learning-centers/gene-function/gene-editing/gene-editing-tools-and-information/introduction-to-the-crispr/images/320-Gene_Editing/CC-TechFigs/CAS9_BSC01_94260.gif)
CRISPR/ cas9介导的基因破坏原理。单个引导RNA (sgRNA),由特定于DNA靶点的crRNA序列和与Cas9蛋白相互作用的tracrRNA序列组成(1),结合到具有DNA内切酶活性的Cas9蛋白的重组形式(2)。由此产生的复合物将导致靶向的双链DNA切割(3)。切割位点将被非同源端连接(NHEJ) DNA修复途径修复,一个容易出错的过程,可能导致插入/删除(INDELs),从而破坏基因功能(4)。
CRISPR/Cas9技术彻底改变了基因组编辑,实现了以前无法达到的基因组靶向、效率和简便性水平。it指南产品通过提供以下简化方法,进一步提高了CRISPR/Cas9系统的可用性:
CRISPR / Cas9信息
选择sgRNA设计工具
浏览一系列用于cas9基因编辑实验的sgRNA设计工具。
选择CRISPR/Cas9基因编辑的目标序列
学习如何为成功的基因编辑设计sgRNA序列。
靶向基因组编辑CRISPR/Cas9系统
基因组编辑CRISPR/Cas9系统概述
CRISPR/Cas9基因组编辑工具
一个成功的基因组编辑工作流程中每个步骤可用的工具的概述。
基因编辑技术说明
使用各种创新工具将Cas9和sgRNA递送到哺乳动物细胞。
SNP工程应用说明
了解在批量编辑或克隆细胞群体中灵敏检测单核苷酸替换的简单分析。
CRISPR / Cas9 gesicles概述
了解guideit CRISPR/Cas9 Gesicle生产系统组件和工作流程。
CRISPR文库筛选网络研讨会
观看本次网络研讨会,了解如何轻松执行全基因组慢病毒sgRNA筛选。
选择HDR模板格式
观看关于如何为敲入实验选择正确的HDR模板的网络研讨会。
指南- SNP筛选试剂盒常见问题
获取常见问题的答案,并观看解释酶学分析的视频。
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