CRISPR/Cas9基因敲除
除了创造indel或knockout,科学家可以通过提供DNA序列来鼓励精确的修复形式(同源定向修复;HDR),细胞可以将其用作修复模板,在断裂处插入(敲入)匹配的DNA序列。示例应用包括修饰启动子序列或基因、插入外源报告子(例如荧光蛋白)或创建疾病模型的临床相关SNP。应该注意的是,敲除效率通常低于敲除效率。此外,基因/序列的一个拷贝的敲除通常伴随着第二个拷贝的敲除/插入;两个拷贝都被Cas9/sgRNA复合物切割,但其中一个可能使用非同源末端连接(NHEJ)途径修复不精确,从而产生indel。
下面的链接提供了一般信息、技术说明和用于创建或研究基因敲除的工具。尽管许多模板格式(质粒、PCR产物、病毒、转座子等)可用于HDR,单链DNA (ssDNA)模板的使用由于越来越多的人认识到单链DNA整合比双链DNA(dsDNA)模板更具特异性且毒性更小,因此单链DNA整合的研究正在迅速增加。
选择HDR模板格式
观看关于如何为敲入实验选择正确的HDR模板的网络研讨会。
Homology-directed修复常见问题
通过阅读我们的研发团队编写的常见问题,最大限度地提高您成功的可能性。
T细胞和造血干细胞的基因编辑
遵循我们的研发团队开发的简单的CRISPR/ cas免疫细胞基因编辑协议。
使用长ssDNA的位点特异性基因敲入
使用Guide-it长ssDNA生产系统v2产生长ssDNA序列的基因敲入。
iPS细胞中CRISPR/ cas9介导的敲入蛋白
数据显示,使用guideit长ssDNA生产系统生成的HDR模板,iPS细胞的基因组编辑效率高。
CRISPR向诊所迈出了一大步
了解一种强大的重新编程T细胞的新方法的发展。
鼠标CRISPR敲入协议
获取客户开发的小鼠胚胎精确基因组编辑协议。
电穿孔级Cas9用于不同细胞类型的编辑
我们的Cas9可以进行高效的基因编辑,包括iPS和造血干细胞。
筛选有效的引导rna
在将sgRNA输送到细胞之前,使用一种新的体外分析方法来准确预测sgRNA的切割效率。
在iPS细胞中用AcGFP1标记内源性基因
标记内源性基因以生成报告基因的工作流程。
在iPS细胞中用myc标记标记内源性基因
用表位标签标记内源性基因的工作流程。
高效SNP工程
了解在批量编辑或克隆细胞群体中灵敏检测单核苷酸替换的简单分析。
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