- 在左侧栏的“选择项目类型”框中将选择更改为“Mutagenesis”。(打开引物设计工具,默认选择“克隆”)
辅导的
删除和替换任意向量中的序列
下面的方案向您介绍了设计PCR引物的步骤,以删除序列,同时在任何载体上用不同的序列替换它,只需一轮融合克隆。这个过程是理想的领域交换研究。使用我们的在线初级设计工具致:
- 加上你选择的向量序列,
- 指定要删除的确切核苷酸,
- 输入更换顺序,然后
- 根据您的设计下载引物和PCR信息。
A.选择项目类型
B.输入向量序列
使用“添加要诱变的载体”框以下列方式之一输入载体序列:
提供您自己的向量序列
- 点击“输入序列”。
- 将您的核苷酸序列粘贴到文本框作为纯文本,没有核苷酸或行编号。
从预加载的向量列表中选择
- 点击“选择Takara或克隆技术矢量”旁边的加号。
- 从列表中选择一个向量。
C.选择要替换的序列
- 在屏幕右侧的窗格中,通过单击矢量地图图像跳转到常规区域或要素,导航到要修改的区域。
- 使用核苷酸视图选择并突出显示您希望删除的确切序列。
D.输入替换顺序
- 在“选择修改”框中,单击[替换选择]按钮。
- 在载体核苷酸视图顶部的框中输入替换所选区域的序列,然后按进来在你的键盘。
- 仔细检查构造图和序列是否显示正确的删除和替换序列。
e .设计引物
- 当您对您的修改选择感到满意时,点击[Design primer]按钮。
- 查看您的结果。窗口将从窗口切换设计页附页结果页面选项卡。这个标签分为以下几部分:最终的矢量图/序列和带有oligo和PCR信息的输出协议(参见步骤3)。
- 点击页面底部的[下载结果]按钮,以Excel文件的形式下载入门信息。此数据可输入任何核苷酸序列分析软件工具,如SnapGene Viewer (网上免费提供),这使得在正反义链中的融合克隆引物位置易于可视化。
无缝克隆引物设计技巧
在设计无缝克隆项目时要记住的有用提示。
融合克隆引物设计教程
了解如何使用我们的在线工具为每个融合克隆项目快速、轻松地设计引物。
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