成功的DNA克隆对医学、兽医和农业研究的DNA工程流程至关重要。在已完成的结构中的一个错误可能会破坏下游步骤,因此,最初的筛选过程必须找到正确的克隆。然而,这个过程是昂贵的和劳动密集型的,特别是当克隆技术是低效的和结果结构是不准确的。
融合Snap克隆提供独特的优势在其他商业上可用的无缝克隆套件,包括基于Gibson组装的方法(表1)。
在融合快速克隆 | 吉布森基于克隆 | |
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菌落计数 |
更多,特别是在困难的克隆实验中 | 在困难的克隆实验中很少或没有菌落 |
聚合酶介导的结点填充 |
没有:依赖于有能力的细胞机制,减少了出错的可能性 | 使用DNA聚合酶:在连接处更容易出现序列错误 |
培养时间 |
15分钟 | 最多60分钟 |
连接酶介导的体外封闭 |
没有连接酶:空载体的可能性较少,以重新加强,产生较少的背景 | 体外结扎:重新结扎的载体产生更多的背景菌落 |
从PCR A-overhangs |
不受影响:3'外切酶消除在PCR步骤中产生的a悬垂 | 受影响:5'外切核酸酶酶活性并不能消除A型突出,降低效率 |
PCR引物 |
15-nt重叠 | 通常长;20 - 30元重叠 |
表1融合克隆与基于Gibson程序集的克隆方法的比较
在这里,我们展示了在两个特别困难的实验中的Geneart Gibson组装HIFI主混合物中的融合卡套装主混合的优异性能:多碎片克隆和大片段插入。并排比较显示了融合的克隆克隆越令人生畏的挑战,产生高菌落计数和始终如一的精确构建。