细胞外囊泡隔离常见问题GydF4y2Ba
这GydF4y2BaCapturem细胞外囊泡隔离套件GydF4y2Ba提供了一种完整的解决方案,用于从各种生物流体(例如血浆,血清,尿液,牛奶,唾液,细胞条件培养基和脑脊液)的简单和快速分离的完全溶液。我们提供两种典型的KIT-MINI和MAXI格式 - 因此您可以从一系列示例卷中净化EV。GydF4y2Ba
对于下面没有回答的任何问题,请参阅产品表中可访问的用户手册和其他文档GydF4y2Ba这一页GydF4y2Ba。请GydF4y2Ba联系我们GydF4y2Ba如果您找不到您的问题的答案。GydF4y2Ba
Capturem EV列中使用什么结合的化合物?GydF4y2Ba
Capturem EV旋转柱含有膜,其用凝集素基底物官能团结合细胞外囊泡。GydF4y2Ba
Capturem EV方法如何使用超速离心的EV隔离不同?GydF4y2Ba
- 超速离心根据密度分离颗粒。因此,它将其分离出不同尺寸的混合物的混合群,以及非EV污染物,例如白蛋白等蛋白质。由于高速,这个过程非常苛刻,并且经常损害EVS。GydF4y2Ba
- Capturem细胞外囊泡分离试剂盒具体地分离小于200nm的EV。该过程温柔,EVS保持完整的下游应用,例如电子显微镜。GydF4y2Ba
为什么蛋白质浓度与Capturem细胞外囊泡隔离试剂盒较低,而不是超速离心呢?GydF4y2Ba
Capturem EV列提供一种没有污染蛋白质的高纯度EV样本。超速离心产生包括杂质的样品,例如白蛋白。因此,由于这些杂质,超速离心将给出更高的总蛋白质浓度。GydF4y2Ba
我可以直接使用纯化的样品进行下游应用吗?GydF4y2Ba
我们的套件用含有基于含有有机盐的磷酸盐的缓冲液炼素EV。洗脱的颗粒可以直接用于物理粒子分析,例如纳米粒子跟踪分析(NTA)和用于细胞摄取测定的标记。如果您的下游应用涉及蛋白质和/或RNA提取,则需要先对洗脱的样品进行分配或脱静。GydF4y2Ba
我可以使用不同的洗脱缓冲区吗?GydF4y2Ba
是的,您可以使用使用甘露糖或葡萄糖缓冲液使用竞争洗脱。但是,这将降低您的EV产量,并且您需要确定这些缓冲区是否与下游应用程序兼容。GydF4y2Ba
我可以超声纯化的evs for Western印迹分析吗?GydF4y2Ba
是的。我们在水声器(超声波清洁剂,JSP)中,在20°C时将样品在20°C下进行10分钟。如果您使用的是不同的Sonicator,则可能需要优化。GydF4y2Ba
如何浏览纯化的电子样品?GydF4y2Ba
我们建议以下步骤:GydF4y2Ba
- 在AMICOL Ultra-0.5离心过滤器单元(由使用者提供的3-KDA或10-KDA MWCO,用Maxi Kit获得的Maxi Kit中获得的500μL样品)加载与迷你试剂盒(或用Maxi Kit获得的样品)一起获得的整个样品。如果样品体积小于500μL,则将水加入过滤器单元以使体积可达500μL。以14,000离心GydF4y2BaGGydF4y2Ba5-30分钟并丢弃流动。GydF4y2Ba
- 将水添加到过滤器单元中,使体积高达500μL,并以14,000离心GydF4y2BaGGydF4y2Ba5-30分钟。GydF4y2Ba
- 将滞留物(过滤器中的样品)转移到新的2ml收集管(由用户提供)。GydF4y2Ba
- 对于用MAXI试剂盒获得的样品,用剩余的500μL样品重复步骤1-3。GydF4y2Ba
我希望从EV样品中净化多少蛋白质和RNA?GydF4y2Ba
此数字可以根据输入样本类型,体积和条件而异。在我们的经验中,对于从1ml血浆中回收的EV,从EV货物产生约1ng的RNA和5μg蛋白质。GydF4y2Ba
Maxi Column的EV产量如何与Mini列的产量进行比较?GydF4y2Ba
从1毫升等离子体,Capturem EV Maxi柱给出了比迷你柱大的10倍的EV产量。Capturem EV Maxi列以其最大容量,〜10的EV产量(EV总数)GydF4y2Ba11.GydF4y2Ba。GydF4y2Ba
预清除栏目的目的是什么?GydF4y2Ba
预清除柱去除任何大膜片段,凋亡体,较小的细胞片段等,否则将堵塞Capturem柱并防止EV隔离。GydF4y2Ba
Amicon过滤器单元的目的是什么,为什么需要?GydF4y2Ba
过滤单元除去非特异性蛋白质聚集体,脂蛋白,细胞因子等,导致通过荧光纳米粒子跟踪分析测量的纯度较高的EV。GydF4y2Ba
使用MINI套件时,可以单独购买哪种AMICON过滤器,我需要单独购买吗?GydF4y2Ba
购买AMICON Ultra-0.5离心过滤装置(Thermo Fisher Scientific,Cat。#UFC510024),拥有100 kda MWCO。请务必按照我们协议中的描述使用过滤器。GydF4y2Ba
我可以用蛋白酶k治疗Capturem-孤立的EV,以从样品中除去大量蛋白质,而不是使用Amicon过滤器?GydF4y2Ba
您可以使用蛋白酶K,但可能导致暴露在EVS表面上的蛋白质的部分降解,因此影响您在下游分析中检测这些蛋白质的能力。GydF4y2Ba
对于Maxi列,我可以使用摆动铲斗或固定角转子吗?GydF4y2Ba
是的,可以使用摆动铲斗转子或固定角转子。GydF4y2Ba
来自生物流体的快速,纯净,浓缩的细胞外囊纯化GydF4y2Ba
查看有关如何始终获得纯,浓缩的EV的数据,随后的蛋白质组学,基因组和转录组分析具有足够的产量。GydF4y2Ba
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