阿尔茨海默病的免疫治疗抗体工程
许多神经退行性疾病的特征是脑组织中特异性蛋白质的异常积累。在阿尔茨海默病中,这些聚集物由淀粉样斑块和神经原纤维缠结组成(分别由淀粉样β[Aβ]和tau组成)。由于Aβ和tau都具有神经毒性,往往与认知能力下降相关,并诱发炎症,目前的模型表明,它们的聚集会触发下游病理级联,导致神经退行性变,最终导致阿尔茨海默病(Bloom 2014;Laurent,Buée和Blum 2018)。
因此,这些蛋白质聚集体代表了有吸引力的治疗靶标。临床研究的主要推动是抗Aβ的开发和测试,最近,抗Tau抗体。虽然该领域经历过挫折(纪念等等。, 2018; Selkoe 2019),越来越多的抗体进入临床试验(在Cummings进行审查)等等。2018年),并提供了希望,即清除这些聚集物可能阻止并有可能逆转这种使人衰弱的疾病的进展。为了促进这项工作,我们提供了简单、快速、高通量抗体生成和纯化的端到端的抗体工程解决方案。
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抗体可变区智能扩增
我们的更智能的比赛装备利用我们独特的SMART (S.魔力m机狱一种这不是5英尺的尽头R.NAT.emplate)技术,以提供原始重(H),κ轻链[L(κ)],或λ轻链[L(λ)]的真实表示的mRNA转录物,从少至10 ng总RNA(图1)。与许多其它的RACE-PCR方法,我们的更胜一筹的RACE技术捕获的5' 转录物的端部和,再加上添加在5' 所述SMART序列的端,提供了全长的,均匀的基因体覆盖。这种优化的技术是鲁棒的,拥有低背景和高扩增效率,并且可以用于污染的gDNA样品来甚至使用。最后,简化工作流程,这些套件包括我们专有的IN-FUSION克隆技术(见下文),以方便您的RACE片段的快速,高精度的克隆。
图1.实验工作流的抗体可变结构域更聪明5' RACE的概述。
高效,高通量产生抗体构建体
我们的IN-FUSION HD克隆加技术(图2)通过允许快速产生和筛选功能克隆来增强抗体发现和工程工作流程。对单个克隆的筛选通常通常是抗体工程工作流的最耗时的步骤之一。然而,与传统的连接基方法不同,融合克隆是高效的,具有极低的背景,并且为单插入克隆具有> 95%的成功率。我们的融合技术也是快速(15分钟)和无缝的,允许在单一反应中使多达几种PCR片段的定向克隆到任何目的载体中。由于这些益处,我们的融合技术具有多种高通量抗体克隆工作流程(陈等等。2014;孟等等。2015;蜘蛛侠等等。2016;Rudkin等等。2018)。
图2。Fusion中克隆工作流概述。
在从您的表达构建体中产生抗体后,我们的下一代CAPTEREM净化技术能够在5-15分钟内快速,高质量和高通量抗体纯化。Capturem柱和板是无树脂的,利用含有固定化蛋白A或G(图3)的高容量尼龙膜的系统(图3),允许从复合物开始样品(如杂交瘤上清液和血清)的直接抗体纯化。这些技术以各种格式(MiniPreps,Maxipreps,24孔板和96孔板)提供,并且是抗体克隆的快速,高通量筛选的理想选择。
图3.图像详述了Capturem高容量膜的内部。
为AD及Αβ和tau靶向抗体的研制提供参考
Bloom,G.S.淀粉样β和tau。jama neurol。71,505 (2014).
卡明斯,J.,李,G.,里特,A.和钟,K.阿尔茨海默病药物开发管道:2018年。阿尔茨海默氏症的饮料。(纽约,N. Y.)4,195–214 (2018).
霍宁,L.S。等等。solanezumab治疗阿尔茨海默病所致轻度痴呆的试验。n.ngl。J.Med。378,321–330 (2018).
Laurent,C.,Buée,L.&Blum,D. Tau和神经炎炎症:对阿尔茨海默病和部落观点有什么影响?生物群落。J41,21–33 (2018).
阿尔茨海默病和aducanumab:调整我们的方法。纳特。牧师。神经病学。15,365-366(2019)。
引用融合内HD克隆用于高通量抗体克隆的参考文献
Chen,C.-G.,Fabri,L.J.,Wilson,M.J.和Panousis,C.噬菌体展示抗体片段的一步零背景IgG重新格式化,实现快速和高通量的铅鉴定。核酸RES。42,E26-E26(2014)。
孟,W。等等。从恒河猴单个抗体分泌细胞高效生成单克隆抗体。mabs.7,707-18(2015)。
Rudkin,F. M.等等。单个人类B细胞来源的单克隆抗念珠菌抗体增强吞噬功能和防止散播性念珠菌病。NAT。安排。9,5288 (2018).
陈媛媛,陈玉英,陈玉英,陈玉英,陈玉英。HEK293细胞中抗体的快速高通量克隆和稳定表达。J.Immunol。方法439,50–58 (2016).
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