如何选择合适的他标记的纯化树脂
在你研究的宏伟计划中,你用来净化你的结构的树脂似乎是一个更琐碎的决定。毕竟,你的实验室伙伴使用的树脂似乎很有效。然而,每一种蛋白质结构都有一点不同,所以在你的实验室中工作的树脂可能并不适合你的项目。他标记的蛋白质是用固定化金属亲和层析(IMAC)树脂纯化的,IMAC树脂有多种金属芯,最流行的是镍(Ni)2+)或钴基(Co2+)树脂。下一步his标记蛋白纯化的正确选择是哪一个?答案在于确定产量或纯度对下游应用是否更为重要。
公司绩效的差异2+-和倪2+-基于IMAC的树脂是每个金属离子在反应核心中的空间定位影响组氨酸结合的特异性和能力的结果(因为,正如所有蛋白质研究人员所知,结构影响功能!)钴基树脂提供更好的特异性,从而获得更高的纯度,而镍基树脂具有更好的吸附性能,因此具有更高的结合能力。每种类型的树脂都有其优点和局限性,具体取决于您的具体应用。
钴基树脂
优势
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应用程序
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钴基树脂的反应核对组氨酸的空间定位有严格的要求,只有含有相邻组氨酸的蛋白质或特殊定位相邻组氨酸的蛋白质才能结合钴在该反应核中,因此钴的纯度较高,但产率较低。如果需要非常纯的蛋白质用于高灵敏度的方法,如晶体学和功能分析,则使用钴基树脂。
镍基树脂
优势
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应用程序
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镍基树脂的反应核心对空间的要求不那么严格,所以它结合的组氨酸位于蛋白质的多组氨酸标签以外的地方,导致更高的产量和较低的纯度。镍基树脂通常以亚氨基二乙酸(IDA)和氮三乙酸(NTA)作为螯合配体,它们与金属离子的配位强度不同。IDA与Ni有三个配位点2+离子,留下三个开放的位点供组氨酸残基与离子相互作用。另一方面,NTA与Ni有四个协调点2+离子,只留下两个位置的组氨酸残基。因此,ida基树脂具有较高的结合能力。然而,需要注意的是,IDA和Ni之间的协调能力较弱2+离子还导致金属浸出到净化缓冲液的可能性增加,这可能会对一些下游应用产生负面影响。如果你的主要目标是纯化大量的蛋白质用于标记实验和抗体生产,那么镍基树脂是更好的选择。
总结
作为蛋白质研究的早期步骤,选择合适的IMAC树脂用于his标记的蛋白质纯化,对于实现下游应用的最佳结果至关重要。很难提前预测哪种树脂对给定的结构最有效,所以最好的方法通常是在小规模批量纯化中测试几种树脂,并评估哪种产量和纯度组合最适合您的情况。为了了解更多关于为你的实验选择最好的他标记蛋白纯化方法的知识,阅读我们的his标记蛋白纯化概述.
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